Instal·lacions i equipament
El grup disposa de tecnologia d'última generació per realitzar recerca de frontera en biotecnologia reproductiva.
Instal·lacions
Els nostres laboratoris a la Universitat de Girona, on duem a terme la recerca del dia a dia.
Equipament
CASA (Computer-Assisted Sperm Analysis)
Sistema automàtic per a l'anàlisi del moviment espermàtic mitjançant visió per computador. Mesura paràmetres cinemàtics de motilitat, velocitat mitja (VAP), velocitat de desplaçament (VSL), velocitat curvilínia (VCL) i índex d'aleatorietat (ALH) segons criteris estandarditzats per a l'avaluació de la qualitat seminal.
Citòmetre de flux CytoFLEX
Equip multiparamètric per a l'anàlisi de poblacions cel·lulars a alt rendiment, equipat amb 3 làsers (405, 488 i 638 nm) i 10 filtres d'emissió. Permet l'avaluació simultània de múltiples marcadors funcionals en espermatozoides: viabilitat, integritat acrosomal, potencial de membrana mitocondrial, generació de ROS, apoptosi, fragmentació d'ADN i síntesi d'ARN de novo.
Microscopi de fluorescència
Sistemes d'epifluorescència directa i invertida equipats amb objectius de gran augment i configuracions òptiques per a la visualització de teixits i cèl·lules marcades amb fluoròfors. Aplicat a l'anàlisi de marcadors de viabilitat, integritat acrosomal, danys cromosomals i localització intracel·lular de proteïnes mitjançant immunofluorescència.
Programmable Rate Freezer
Sistema de congelació controlada per a la criopreservació de gametes i embrions. Permet establir rampes de refredament precisos i repetibles, optimitzant la formació de cristalls de gel i minimitzant els danys per estrès osmòtic durant el procés de congelació.
Fluorímetre
Espectrofotòmetre de fluorescència per a la mesura de fluorescència emesa per biomolècules en solució. Aplicat a l'avaluació de la integritat de la membrana plasmàtica, activitat mitocondrial i altres marcadors de qualitat espermàtica mitjançant sondes fluorescents.
Espectrofotòmetre
Instrument per a la mesura d'absorbància i transmitància de solucions a longituds d'ona específiques. Permet l'avaluació de la concentració i puresa de proteïnes, àcids nucleics i altres biomolècules, així com assajos colorimètrics basats en reaccions enzimàtiques.
Termociclador real-time i convencional
Equips per a la Reacció en Cadena de la Polimerasa (PCR). El termociclador convencional realitza amplificació d'àcids nucleics amb detecció a temps final; el termociclador real-time (qPCR) permet la monitorització contínua de l'amplificació durant cada cicle, possibilitant la quantificació relativa i absoluta d'ARNm i ADN.
Cabines de flux laminar
Espais de treball estèrils equipats amb filtracions HEPA que mantenen un entorn lliure de partícules contaminants. Essencials per a les tècniques de cultiu cel·lular, preparació de mostres i manipulacions que requereixen esterilitat.
Càmeres timelapse per a embrions (CytoSMART LUX2)
Sistema d'incubació amb captura automàtica d'imatges a intervals regulars sense extreure els embrions de l'incubador. Permet la monitorització contínua del desenvolupament embrionari, l'anàlisi de la morfocinètica i la identificació de biomarcadors predictius d'implantació basats en els temps de divisió.
Tancs de nitrogen líquid
Sistemes de crioconservació per a l'emmagatzematge a llarg termini de semen, oòcits i embrions a -196 °C. Els tancs de nitrogen, inclosos els sistemes de nitrogen sec, mantenen l'estabilitat de temperatura i permeten la preservació indefinida de gametes i material reproductiu.
Micromanipulador
Equip de micromanipulació precisa per a la injecció intracitoplasmàtica de semen (ICSI), aspiració d'oòcits i manipulació embrionària. Permet moviments tridimensionals de precisió micromètrica controlats manualment o motoritzats.
Take3
Instrument per a la mesura de concentració i puresa de proteïnes i àcids nucleics en volums ultrareduïts (1-2 μL). Permet l'avaluació ràpida del contingut proteic, la integritat del DNA/ARN i el grau de contaminació en mostres de laboratori sense requerir cuvetes.
TissueLyser
Homogeneïtzador de teixits i cèl·lules mitjançant agitació d'alta velocitat amb boles per a la disrupció mecànica de mostres biològiques. Permet l'extracció eficient i reproduïble d'àcids nucleics i proteïnes a partir de teixits, processant múltiples mostres simultàniament.
Osmòmetre
Equip per a la mesura de l'osmolalitat de solucions i medis mitjançant el descens crioscòpic. Essencial per al control de qualitat de diluents seminals, medis de criopreservació i solucions de reproducció assistida, garantint condicions osmòtiques òptimes per a la supervivència de gàmetes i embrions.
Equipament bàsic de laboratori
Campana de gasos amb filtratge de qualitat, autoclau per a esterilització per vapor, pHmetre per a control de pH en medis de cultiu, centrífugues de tubs i plaques de microtítol, cambres fredes (4 °C) per a emmagatzematge de reactius termosensibles, congeladors -20 °C per a conservació de mostres i -80 °C per a conservació a llarg termini de mostres i reactius biològics.
SensorDish® Reader (PreSens GmbH)
Equip de lectura de plaques de 24 pous equipat amb sensors òptics de fluorescència per a la mesura en temps real del consum d'oxigen dissolt en medis de cultiu. Permet l'avaluació simultània de múltiples mostres amb registres de concentració d'oxigen a intervals de 30 segons, en condicions controlades de temperatura (38 °C) i atmosfera (5% CO₂), essencial per a l'estudi de la respiració mitocondrial i el metabolisme energètic de cèl·lules reproductives.
Tècniques
Seminograma (CASA)
Avaluació dels paràmetres seminals —concentració, motilitat, cinètica i morfologia— mitjançant sistemes CASA (Computer-Assisted Sperm Analysis). Permet l'anàlisi objectiva i estandarditzada de la qualitat espermàtica segons criteris de l'OMS.
Criopreservació espermàtica
Protocols de congelació i vitrificació optimitzats per a la conservació a llarg termini de semen d'espècies animals i humà. Inclou l'avaluació de la criotolerància i la identificació de biomarcadors predictius de la supervivència postdescongelació.
Fecundació in vitro
Procediments de maduració in vitro d'oòcits (MIV), capacitació espermàtica, fecundació i cultiu embrionari. Aplicació en models animals i en tecnologies de reproducció assistida.
Citometria de flux
Anàlisi multiparamètrica de poblacions espermàtiques a alta velocitat. Avaluació simultània d'una desena de marcadors funcionals, incloent: viabilitat (SYBR-14/PI), integritat acrosomal (PNA-FITC), potencial de membrana mitocondrial (JC-1), espècies reactives d'oxigen (CellROX, H2DCF, HE, MitoSOX), apoptosi (Annexin V/PI), fragmentació d'ADN (TUNEL), i altres marcadors de danys cel·lulars.
Comet assay
Electroforesi en gel de cèl·lula única (SCGE) per a la detecció de trencaments d'ADN de cadena simple (assaig alcalí) i de doble cadena (assaig neutre). Requereix la descondensació completa de la cromatina espermàtica per a una anàlisi adequada.
TUNEL
Assaig de marcatge enzimàtic dels extrems 3'-OH de l'ADN fragmentat mitjançant la terminal deoxinucleotidil transferasa (TdT). Avaluable tant per microscòpia de fluorescència com per citometria de flux. Mètode directe i sensible per quantificar la fragmentació d'ADN espermàtic.
SCSA (Sperm Chromatin Structure Assay)
Avaluació de l'estructura de la cromatina espermàtica mitjançant taronja d'acridina i citometria de flux. Proporciona l'índex de fragmentació d'ADN (DFI) i la fracció d'espermatozoides amb cromatina immadura (HDS).
SCD (Sperm Chromatin Dispersion)
Test de dispersió de la cromatina basat en la desnaturalització àcida i l'eliminació de proteïnes nuclears. Genera halos de dispersió característics que permeten classificar els espermatozoides segons la integritat del seu ADN. Disponible en variants alcalina i neutra.
Quantificació d'ADN mitjançant fluorimetria
Mesura precisa de la concentració d'ADN mitjançant fluoròmetre i fluoròfors que s'uneixen selectivament a l'ADN de doble cadena. Ofereix una quantificació més sensible i específica que l'espectrofotometria, especialment en mostres de baixa concentració o amb contaminants.
Western blot
Detecció i semicuantificació de proteïnes específiques en extractes cel·lulars mitjançant electroforesi en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), transferència a membrana i immunodetecció amb anticossos.
Immunofluorescència
Visualització de la localització subcel·lular de proteïnes específiques mitjançant anticossos conjugats amb fluoròfors. Aplicada a l'estudi de proteïnes implicades en la capacitació, la reacció acrosòmica i la senyalització cel·lular espermàtica.
Microscòpia confocal
Obtenció d'imatges de teixits i cèl·lules amb alta resolució espacial en tres dimensions. Permet la colocalització de múltiples marcadors fluorescents i la reconstrucció tridimensional de compartiments cel·lulars.
Microscòpia electrònica
Observació ultraestructural d'espermatozoides i teixits reproductors a alta resolució. Inclou microscòpia electrònica de transmissió (TEM) i d'escombrat (SEM) per a l'anàlisi morfològica detallada.
Cultius cel·lulars
Manteniment i creixement de cèl·lules en condicions controlades. Aplicació en models in vitro per a l'estudi de la fisiologia reproductiva, toxicologia i assajos funcionals.
RT-qPCR (Real-time PCR)
Detecció i quantificació relativa o absoluta d'ARNm i altres àcids nucleics en temps real. Utilitzada per a l'anàlisi de l'expressió gènica en espermatozoides, teixit testicular i cèl·lules reproductives.
Proteòmica
Identificació i quantificació massiva de proteïnes mitjançant espectrometria de masses (LC-MS/MS, TMT). Aplicada a l'estudi del proteoma espermàtic, del plasma seminal i de vesícules extracel·lulars per a la identificació de biomarcadors de fertilitat.
Metabolòmica
Perfil metabòlic de cèl·lules espermàtiques i plasma seminal mitjançant ressonància magnètica nuclear (¹H-NMR) i cromatografia de gasos-espectrometria de masses (GC-MS). Permet la identificació de metabolits associats a la qualitat espermàtica i la fertilitat.
Avaluació d'espècies reactives d'oxigen (ROS)
Determinació dels nivells intracel·lulars de ROS mitjançant sondes fluorescents (CellROX Deep Red, CellROX Green, DHE) i citometria de flux o microscòpia de fluorescència. Discriminació entre nivells fisiològics i estrès oxidatiu.
Test de Chromomycin A3 (CMA3)
Avaluació del grau de protaminació de la cromatina espermàtica. La CMA3 competeix amb les protamines per la unió als solcs menors de l'ADN ric en GC; una fluorescència elevada indica una substitució histona-protamina deficient.
Avaluació del consum d'oxigen (OCR)
Determinació de l'activitat respiratòria mitocondrial dels espermatozoides. Permet avaluar la capacitat metabòlica mitjançant la mesura de la taxa de consum d'oxigen.