Instalaciones y equipamiento
El grupo dispone de tecnología de última generación para realizar investigación de frontera en biotecnología reproductiva.
Instalaciones
Nuestros laboratorios en la Universidad de Girona, donde llevamos a cabo la investigación del día a día.
Equipo
CASA (Computer-Assisted Sperm Analysis)
Sistema automático para el análisis del movimiento espermático mediante visión por computador. Mide parámetros cinemáticos de motilidad, velocidad media (VAP), velocidad de desplazamiento (VSL), velocidad curvilínea (VCL) e índice de aleatoriedad (ALH) según criterios estandarizados para la evaluación de la calidad seminal.
Citómetro de flujo CytoFLEX
Equipo multiparamétrico para el análisis de poblaciones celulares a alto rendimiento, equipado con 3 láseres (405, 488 y 638 nm) y 10 filtros de emisión. Permite la evaluación simultánea de múltiples marcadores funcionales en espermatozoides: viabilidad, integridad acrosómica, potencial de membrana mitocondrial, generación de ROS, apoptosis, fragmentación de ADN y síntesis de ARN de novo.
Microscopio de fluorescencia
Sistemas de epifluorescencia directa e invertida equipados con objetivos de gran aumento y configuraciones ópticas para la visualización de tejidos y células marcadas con fluoróforos. Aplicado al análisis de marcadores de viabilidad, integridad acrosómica, daños cromosómicos y localización intracelular de proteínas mediante inmunofluorescencia.
Programmable Rate Freezer
Sistema de congelación controlada para la criopreservación de gametos y embriones. Permite establecer rampas de enfriamiento precisas y repetibles, optimizando la formación de cristales de hielo y minimizando los daños por estrés osmótico durante el proceso de congelación.
Fluorímetro
Espectrofotómetro de fluorescencia para la medición de fluorescencia emitida por biomoléculas en solución. Aplicado a la evaluación de la integridad de la membrana plasmática, actividad mitocondrial y otros marcadores de calidad espermática mediante sondas fluorescentes.
Espectrofotómetro
Instrumento para la medición de absorbancia y transmitancia de soluciones a longitudes de onda específicas. Permite la evaluación de la concentración y pureza de proteínas, ácidos nucleicos y otras biomoléculas, así como ensayos colorimétricos basados en reacciones enzimáticas.
Termociclador real-time y convencional
Equipos para la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). El termociclador convencional realiza amplificación de ácidos nucleicos con detección a tiempo final; el termociclador real-time (qPCR) permite la monitorización continua de la amplificación durante cada ciclo, posibilitando la cuantificación relativa y absoluta de ARNm y ADN.
Cabinas de flujo laminar
Espacios de trabajo estériles equipados con filtraciones HEPA que mantienen un entorno libre de partículas contaminantes. Esenciales para las técnicas de cultivo celular, preparación de muestras y manipulaciones que requieren esterilidad.
Cámaras timelapse para embriones (CytoSMART LUX2)
Sistema de incubación con captura automática de imágenes a intervalos regulares sin extraer los embriones del incubador. Permite la monitorización continua del desarrollo embrionario, el análisis de la morfocinética y la identificación de biomarcadores predictivos de implantación basados en los tiempos de división.
Tanques de nitrógeno líquido
Sistemas de crioconservación para el almacenamiento a largo plazo de semen, oocitos y embriones a -196 °C. Los tanques de nitrógeno, incluyendo sistemas de nitrógeno seco, mantienen la estabilidad de temperatura y permiten la preservación indefinida de gametos y material reproductivo.
Micromanipulador
Equipo de micromanipulación precisa para la inyección intracitoplasmática de esperma (ICSI), aspiración de oocitos y manipulación embrionaria. Permite movimientos tridimensionales de precisión micrométrica controlados manualmente o motorizados.
Take3
Instrumento para la medición de concentración y pureza de proteínas y ácidos nucleicos en volúmenes ultrareducidos (1-2 μL). Permite la evaluación rápida del contenido proteico, la integridad del ADN/ARN y el grado de contaminación en muestras de laboratorio sin requerir cubetas.
TissueLyser
Homogeneizador de tejidos y células mediante agitación de alta velocidad con bolas para la disrupción mecánica de muestras biológicas. Permite la extracción eficiente y reproducible de ácidos nucleicos y proteínas a partir de tejidos, procesando múltiples muestras simultáneamente.
Osmómetro
Equipo para la medición de la osmolalidad de soluciones y medios mediante el descenso crioscópico. Esencial para el control de calidad de diluyentes seminales, medios de criopreservación y soluciones de reproducción asistida, garantizando condiciones osmóticas óptimas para la supervivencia de gametos y embriones.
Equipamiento básico de laboratorio
Campana de gases con filtrado de calidad, autoclave para esterilización por vapor, pHmetro para control de pH en medios de cultivo, centrífugas de tubos y placas de microtítulo, cámaras frías (4 °C) para almacenamiento de reactivos termosensibles, congeladores -20 °C para conservación de muestras y -80 °C para conservación a largo plazo de muestras y reactivos biológicos.
SensorDish® Reader (PreSens GmbH)
Equipo de lectura de placas de 24 pocillos equipado con sensores ópticos de fluorescencia para la medición en tiempo real del consumo de oxígeno disuelto en medios de cultivo. Permite la evaluación simultánea de múltiples muestras con registros de concentración de oxígeno a intervalos de 30 segundos, en condiciones controladas de temperatura (38 °C) y atmósfera (5% CO₂), esencial para el estudio de la respiración mitocondrial y el metabolismo energético de células reproductivas.
Técnicas
Seminograma (CASA)
Evaluación de los parámetros seminales —concentración, motilidad, cinética y morfología— mediante sistemas CASA (Computer-Assisted Sperm Analysis). Permite el análisis objetivo y estandarizado de la calidad espermática según criterios de la OMS.
Criopreservación espermática
Protocolos de congelación y vitrificación optimizados para la conservación a largo plazo de semen de especies animales y humana. Incluye la evaluación de la criotolerancia y la identificación de biomarcadores predictivos de la supervivencia postdescongelación.
Fecundación in vitro
Procedimientos de maduración in vitro de oocitos (MIV), capacitación espermática, fecundación y cultivo embrionario. Aplicación en modelos animales y en tecnologías de reproducción asistida.
Citometría de flujo
Análisis multiparamétrico de poblaciones espermáticas a alta velocidad. Evaluación simultánea de una decena de marcadores funcionales, incluyendo: viabilidad (SYBR-14/PI), integridad acrosómica (PNA-FITC), potencial de membrana mitocondrial (JC-1), especies reactivas de oxígeno (CellROX, H2DCF, HE, MitoSOX), apoptosis (Annexin V/PI), fragmentación de ADN (TUNEL), y otros marcadores de daños celulares.
Comet assay
Electroforesis en gel de célula única (SCGE) para la detección de roturas de ADN de cadena simple (ensayo alcalino) y de doble cadena (ensayo neutro). Requiere la descondensación completa de la cromatina espermática para un análisis adecuado.
TUNEL
Ensayo de marcaje enzimático de los extremos 3'-OH del ADN fragmentado mediante la terminal deoxinucleotidil transferasa (TdT). Evaluable tanto por microscopía de fluorescencia como por citometría de flujo. Método directo y sensible para cuantificar la fragmentación de ADN espermático.
SCSA (Sperm Chromatin Structure Assay)
Evaluación de la estructura de la cromatina espermática mediante naranja de acridina y citometría de flujo. Proporciona el índice de fragmentación de ADN (DFI) y la fracción de espermatozoides con cromatina inmadura (HDS).
SCD (Sperm Chromatin Dispersion)
Test de dispersión de la cromatina basado en la desnaturalización ácida y la eliminación de proteínas nucleares. Genera halos de dispersión característicos que permiten clasificar los espermatozoides según la integridad de su ADN. Disponible en variantes alcalina y neutra.
Cuantificación de ADN mediante fluorimetría
Medición precisa de la concentración de ADN mediante fluorómetro y fluoróforos que se unen selectivamente al ADN de doble cadena. Ofrece una cuantificación más sensible y específica que la espectrofotometría, especialmente en muestras de baja concentración o con contaminantes.
Western blot
Detección y semicuantificación de proteínas específicas en extractos celulares mediante electroforesis en gel de poliacrilamida (SDS-PAGE), transferencia a membrana e inmunodetección con anticuerpos.
Inmunofluorescencia
Visualización de la localización subcelular de proteínas específicas mediante anticuerpos conjugados con fluoróforos. Aplicada al estudio de proteínas implicadas en la capacitación, la reacción acrosómica y la señalización celular espermática.
Microscopía confocal
Obtención de imágenes de tejidos y células con alta resolución espacial en tres dimensiones. Permite la colocalización de múltiples marcadores fluorescentes y la reconstrucción tridimensional de compartimentos celulares.
Microscopía electrónica
Observación ultraestructural de espermatozoides y tejidos reproductores a alta resolución. Incluye microscopía electrónica de transmisión (TEM) y de barrido (SEM) para el análisis morfológico detallado.
Cultivos celulares
Mantenimiento y crecimiento de células en condiciones controladas. Aplicación en modelos in vitro para el estudio de la fisiología reproductiva, toxicología y ensayos funcionales.
RT-qPCR (Real-time PCR)
Detección y cuantificación relativa o absoluta de ARNm y otros ácidos nucleicos en tiempo real. Utilizada para el análisis de la expresión génica en espermatozoides, tejido testicular y células reproductivas.
Proteómica
Identificación y cuantificación masiva de proteínas mediante espectrometría de masas (LC-MS/MS, TMT). Aplicada al estudio del proteoma espermático, del plasma seminal y de vesículas extracelulares para la identificación de biomarcadores de fertilidad.
Metabolómica
Perfil metabólico de células espermáticas y plasma seminal mediante resonancia magnética nuclear (¹H-NMR) y cromatografía de gases-espectrometría de masas (GC-MS). Permite la identificación de metabolitos asociados a la calidad espermática y la fertilidad.
Evaluación de especies reactivas de oxígeno (ROS)
Determinación de los niveles intracelulares de ROS mediante sondas fluorescentes (CellROX Deep Red, CellROX Green, DHE) y citometría de flujo o microscopía de fluorescencia. Discriminación entre niveles fisiológicos y estrés oxidativo.
Test de Chromomycin A3 (CMA3)
Evaluación del grado de protaminación de la cromatina espermática. La CMA3 compite con las protaminas por la unión a los surcos menores del ADN rico en GC; una fluorescencia elevada indica una sustitución histona-protamina deficiente.
Evaluación del consumo de oxígeno (OCR)
Determinación de la actividad respiratoria mitocondrial de los espermatozoides. Permite evaluar la capacidad metabólica mediante la medición de la tasa de consumo de oxígeno.